Когда Прохору исполнилось 17 лет, он решил оставить отчий дом. Принял постриг он по совету старицы в Киево-Печерской лавре. Выбор пал на Саровский монастырь в Тамбове. В 1778 году он стал послушником, а полноценным монахом — в 1786 году. Сан иеромонаха ему был присвоен еще через семь лет.
Монах Серафим всегда имел склонность к уединению, поэтому старался жить подальше от других людей. Он жил в лесу в келье, искал сам себе пропитание, соблюдал строжайший пост и постоянно молился. Он не считал это подвигом — таково было его искреннее желание.